近年来，自体富血小板血浆（PRP）及透明质酸（HA）注射技术在皮肤面部年轻化治疗上逐渐兴起。但目前这两项技术在原料制备、应用方法及应用程序等方面始终缺乏一个标准化方案。为此，来自土耳其巴勒凯西尔大学的整形外科医生Ulusal开展了一项临床试验，创新性应用了PRP联合HA注射技术，旨在探讨二者的联合疗法在改善面部老化方面的疗效和安全性，为标准化方案的制定提供数据支持。该研究结果刊文于近期J Cosmet Dermatol。
研究概述
受试者共94名，均为女性，平均年龄为53.0岁。所有受试者均接受多次PRP联合HA注射治疗（平均注射次数为3.6次）。PRP制备方法统一，且注射操作均由同一位医师完成。治疗前1周受试者需停止服用抗凝剂，以防术后青紫的发生。
注射液制备方法
用10％柠檬酸钠采血管中收集受试者自体静脉血约12.5mL，PRP试剂盒 (Dr B PRPTM)处理，1800rpm 离心20～50min直至所有红细胞与血浆分离，白细胞层清晰可见（图1）。若治疗区域为全面部及颈部，则收集血浆层及白细胞层（富血小板血浆PRP及去血小板血浆PPP）；若治疗区域为特定的局部位置（如黑眼圈），则收集血浆层（PRP）。将收集好的血液成分、透明质酸0.5mL及普鲁卡因0.5mL混合。
图1 血液离心后成分模式图
操作步骤
术前局部外敷表面麻醉剂及冰敷，以减轻术中疼痛感。然后将配置好的注射液多点均匀注射到皮肤真皮层中，注射针规格为30G 0.3×13mm，进针深度为5～6mm（图2）。术后冰敷及涂抹抗菌药物。建议受试者注意防晒并常规服用维生素C（1000mg/d）。
图2 操作方法
治疗间隔及次数
初始治疗阶段，注射间隔3～4周，依据个体情况进行至少3次治疗。维持治疗阶段，注射间隔8～10周，至多进行5次治疗。
评价方法
受试者对其皮肤质感、紧致度、色素及整体改善程度进行自我评价（0分=无改善，1分=略有改善，2分=中等改善，3分=明显改善）。采用同样的评估量表，由3名医师通过对比每位受试者治疗前后照片再次评价。皱纹改善评估采用WSRS评分量表，依据皱纹的严重程度记为0～4分，分值越高即表示皱纹越严重。
研究结果
首次治疗后，受试者皮肤各方面均得到改善。其中，皱纹、质感、紧致度的改善程度随注射次数的增多而更加显著（图3）。而色素的改善则与注射次数无明显相关性，皮肤白皙人群往往色素改善更早且更明显。首次治疗后数月，受试者皮肤湿润度明显增加，部分受试者面部原有的痤疮情况也得到改善（图4）。注射2～3次后，皮肤细纹、色泽及眼袋下垂得到改善。经过6次或更多次注射后，由于真皮层增厚，皱纹大部分消失，原本羊皮纸状的干燥皮肤恢复丰满度，颈部皮肤紧致度得到改善（图5）。上唇深皱纹整体改善不明显，需予以额外的干预措施，如填充、皮肤磨削术及激光等。
图3 A）治疗前； B）3次PRP+HA注射治疗后； C）8次PRP+HA注射治疗后（距首次治疗19个月后）
图4 部分受试者痤疮情况得到改善
图5 经5次治疗后，受试者皮肤细纹、紧致度及眼袋下垂情况得到改善
在安全性方面，术后面部轻度浮肿较常见，约8%受试者术后瘀斑持续10天以上。所有受试者均未出现炎症反应及过敏现象。
讨论
皮肤的老化以表皮及真皮层的变化最为显著。而老化的早期阶段主要发生细胞外基质降解。真皮层胶原蛋白、弹性蛋白及网状蛋白的分解可导致皮肤水合能力减弱、弹性降低。已有报道指出PRP中的自体活性成分可诱导光老化的真皮层成纤维细胞合成新的胶原，恢复皮肤弹性。透明质酸是自然界中最亲水的分子之一。由于HA水合反应后可形成膨胀基质，HA也被成功应用在医药和化妆品领域中。
本项研究创新性地应用了PRP和HA联合治疗，并加入局麻剂，不仅有效缓解了注射痛的问题，联合疗法也收获了令人满意的治疗效果。HA的加入可能为PRP中多种生长因子提供了理想的粘性和水合环境。这也支持了HA和PRP治疗可能具有累加效应的猜想。本项研究显示，注射次数可直接影响临床疗效。对于恢复面部轮廓及收紧颈部松弛皮肤等较为困难的问题，多次注射可获得针对性治疗效果。
PRP混合PPP可获得更多的细胞，从而更有利于皮肤的水合作用。另一方面，注射时造成的轻微创伤可激活伤口愈合机制，并诱导真皮层的胶原再生。由于维生素C对Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的合成是必不可少的，因此术后建议受试者常规服用一定剂量的维生素C。
目前制备PRP的最佳血小板浓度尚不清楚。血小板浓度超过106个/μL（约离心前基线平均水平的4～7倍）通常被认为是PRP治疗的有效浓度。本项研究中，血小板浓度（1.389×106个/μL）较基线水平（2.44×105个/μL）高5～6倍。然而，本研究离心时间控制在20～50min不等，由于离心时间对血小板完整性及血小板浓度均有影响，因此三者的制约和平衡关系仍需进一步探讨。
